農藥殘留試劑盒

農藥殘留試劑盒

ELISA試劑盒檢測原理：

試劑盒(he)采用雙抗體一步夾心法酶(mei)聯(lian)免疫吸(xi)附試驗（ELISA）。往預先(xian)包(bao)被（Aflatoxin）抗體的(de)包(bao)被微孔(kong)中(zhong)，依次加入標本、標準品(pin)、HRP標記的(de)檢(jian)測抗體，經過(guo)溫育并*洗滌。用底物(wu)TMB顯色，TMB在(zai)過(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的(de)催化(hua)下轉(zhuan)(zhuan)化(hua)成(cheng)藍色，并在(zai)酸的(de)作用下轉(zhuan)(zhuan)化(hua)成(cheng)終的(de)黃色。顏(yan)色的(de)深淺(qian)和樣品(pin)中(zhong)的(de)（Aflatoxin）呈正相關(guan)。用酶(mei)標儀在(zai)450nm 波長(chang)下測定吸(xi)光度（OD 值），計算(suan)樣品(pin)濃度。

樣品收(shou)集、處理及保存方法：

1.  血(xue)清(qing)：使用(yong)不(bu)含(han)熱原和內毒素的試管，操(cao)作過程中避免(mian)任何細胞(bao)刺激，收集血(xue)液后，3000轉離心10分鐘將血(xue)清(qing)和紅細胞(bao)迅速小(xiao)心地分離。

2.  血漿(jiang)：EDTA、檸檬酸(suan)鹽或肝素抗(kang)凝。3000轉離(li)心(xin)30分(fen)鐘取上清。

3.  細胞上清(qing)液：3000轉離心10分鐘去除顆(ke)粒(li)和聚合(he)物。

4.  組織(zhi)勻漿：將組織(zhi)加入適量生理(li)鹽(yan)水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存(cun)：如果樣本收集后(hou)不及時檢測，請按一次用量(liang)分裝(zhuang)，凍存(cun)于-20℃，避免(mian)反復凍融，在(zai)室(shi)溫下解凍并確保樣品均(jun)勻地充(chong)分解凍。

自備物品(pin)

1.酶標儀（450nm）

2.高精度(du)加樣器(qi)及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫(wen)箱

ELISA試劑盒操(cao)作注意事項：

1、試劑盒保存在2-8℃，使(shi)(shi)用前(qian)室溫(wen)平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有(you)結晶，這屬(shu)于(yu)正(zheng)常現象，水浴加(jia)熱使(shi)(shi)結晶*溶解后再使(shi)(shi)用。

2、實驗(yan)中(zhong)不用(yong)的板條應立(li)即放回自封袋中(zhong)，密(mi)封（低溫干燥）保存。

3、濃度(du)為0的S0號標準品即可視(shi)為陰性對照或(huo)者(zhe)空(kong)白；按照說(shuo)明(ming)書操(cao)作(zuo)時樣(yang)本已經稀釋5倍，終(zhong)結(jie)果乘以5才是樣(yang)本實際濃度(du)。

4、嚴格按照(zhao)說明(ming)(ming)書中標(biao)明(ming)(ming)的(de)時間、加液量及順(shun)序進行溫育操作。

5、所有液體組(zu)分使用前充分搖勻(yun)。

試(shi)劑(ji)盒組成：

注(zhu)：標準品（S0-S5）濃(nong)度依(yi)次為：0、2.5、5、10、20、40 ppb

試劑的準備：

20×洗滌緩沖(chong)液的稀釋(shi)：蒸(zheng)餾水按(an)1：20稀釋(shi)，即1份的20×洗滌緩沖(chong)液加19份的蒸(zheng)餾水。

洗板方法：

1.手工洗(xi)板：甩(shuai)盡(jin)孔(kong)(kong)內液體，每(mei)孔(kong)(kong)加滿洗(xi)滌液，靜置1min后甩(shuai)盡(jin)孔(kong)(kong)內液體，在吸水紙上拍干(gan)，如此洗(xi)板5次(ci)。

2.自動洗板機：每孔注(zhu)入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟：

1.從室溫(wen)平(ping)衡20min后的鋁箔袋(dai)(dai)中取(qu)出所需板(ban)條，剩(sheng)余(yu)板(ban)條用自封(feng)(feng)袋(dai)(dai)密封(feng)(feng)放回(hui)4℃。

2.設(she)置標準(zhun)品(pin)孔(kong)和樣本孔(kong)，標準(zhun)品(pin)孔(kong)各加不同濃(nong)度的標準(zhun)品(pin)50μL；

3.樣本(ben)孔先(xian)加(jia)待測樣本(ben)10μL，再加(jia)樣本(ben)稀釋(shi)液40μL；空白孔不加(jia)。

4.除空白孔(kong)外，標(biao)準品孔(kong)和(he)樣本孔(kong)中(zhong)每孔(kong)加入辣(la)根過氧(yang)化物(wu)酶（HRP）標(biao)記的檢測抗體100μL，用封(feng)板膜封(feng)住反應孔(kong)，37℃水浴鍋或(huo)恒溫(wen)箱溫(wen)育60min。

5.棄去液體，吸水(shui)(shui)紙上拍干(gan)，每(mei)孔加滿洗(xi)(xi)(xi)滌液，靜置1min，甩去洗(xi)(xi)(xi)滌液，吸水(shui)(shui)紙上拍干(gan)，如此重復洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)5次（也可用洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)機洗(xi)(xi)(xi)板(ban)(ban)）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔(kong)加(jia)入終止液50μL，15min內，在(zai)450nm波長處測定各(ge)孔(kong)的OD值。

結果判斷：

繪制標準曲(qu)(qu)線(xian)：在Excel工(gong)作(zuo)(zuo)表(biao)中，以(yi)標準品(pin)濃度作(zuo)(zuo)橫坐(zuo)標，對應OD值作(zuo)(zuo)縱坐(zuo)標，繪制出標準品(pin)線(xian)性(xing)回歸曲(qu)(qu)線(xian)，按曲(qu)(qu)線(xian)方程計算(suan)各樣本濃度值。

試劑盒性能：

1.準確性(xing)：標準品線性(xing)回歸(gui)與預(yu)期濃度相(xiang)關系(xi)數(shu)R值，大(da)于(yu)等于(yu)0.9900。

2.靈(ling)敏度：檢測(ce)濃度小于1.0 ppb。

3.特異性：不(bu)與其它可溶性結(jie)構類似(si)物交叉反應。

4.重復性(xing)：板內、板間變異系(xi)數(shu)均(jun)小于15%。

5.貯(zhu)藏(zang)：2-8℃，避光防潮保存。

6.有效期：6個月

免責聲明：

試(shi)劑盒僅供(gong)研究使用，不(bu)得用于(yu)臨(lin)床(chuang)實驗(yan)或(huo)人體實驗(yan)，否(fou)則(ze)所產生的一(yi)切后果(guo)，由實驗(yan)者承擔，本公司概不(bu)負責。

嚴格按(an)照(zhao)說(shuo)(shuo)明(ming)書操作(zuo)，實(shi)驗(yan)者違(wei)反說(shuo)(shuo)明(ming)書操作(zuo)，后果(guo)由實(shi)驗(yan)者承(cheng)擔。